Në përcaktimin diferencial të enterobaktereve dhe disa vibrios, një vend të veçantë zë reaksioni Voges-Proskauer. Testi bazohet në aftësinë e baktereve për të fermentuar glukozën për të formuar acetoinë.
Thelbi i procesit të kërkimit
Në mikrobiologji, reaksioni Voges-Proskauer përdoret shpesh për të diferencuar brenda familjes së enterobaktereve Yersinia (duke përfshirë patogjenët e pseudotuberkulozit dhe enterokolitit), Escherichia coli dhe aerobet që formojnë spore. Rezultati vizualizohet duke ngjyrosur mediumin kur shtohen reagentë të caktuar.
Ky test i përket serisë IMViC (shkurtesa e Indol, Methyl Red, Voges-Proskauer i Citrate) - një grup testesh identifikimi duke përfshirë përkufizime diferenciale:
- me indol, bazuar në zbërthimin e triptofanit në indol, i përdorur në prani të një reagjenti Kovacs ose Ehrlich;
- duke përdorurmetilroth, ose metil i kuq, i cili zbulon një pH të caktuar si rezultat i metabolizmit të glukozës;
- Reaksionet Voges-Proskauer për zbulimin e acetil-metilkarbinolit;
- shfrytëzimi i citratit me ndryshimin e ngjyrës si rezultat i alkalizimit të mediumit.
Thelbi i procesit është vizualizimi i pranisë së baktereve të diagnostikuara për shkak të ndërveprimit të acetoinës së formuar prej tyre me potasin kaustik në prani të oksigjenit. Acetil-metilkarbinoli oksidohet në diacetil, i cili formon një përbërje të kuqe të ndezur ose rozë. Rritni ndjeshmërinë e testit duke futur alfa-naftol përpara se të shtoni potas kaustik.
Cilësimi i testit
Formulimi i reaksionit Voges-Proskauer përfshin kultivimin paraprak të mikroorganizmave. Një kulturë e pastër mbillet në mjedisin diagnostik diferencial të Clark, një variant i të cilit është lëngu i Clark (pa shtimin e agar-agarit). Ose përdoret medium i gatshëm, ose përgatitet në mënyrë të pavarur. Përbërësit përfshijnë:
- 5g pepton;
- 5g glukozë;
- 5g fosfat dibazik kaliumi;
- 1L distilim.
Gjatë studimit, kultura inokulohet me një lak bakteriologjik steril në një mjedis të lëngshëm. Sasia - 5 ml në një provëz plus kontroll. Inkubimi kryhet në një temperaturë prej 35-37 gradë për dy ditë. Më pas, një studim i reagimit Voges-Proskauer kryhet në faza:
- 2, 5 ml kulturë supë transferohet në një tub steril.
- Shtoni gjashtë pika alfa-naftol (tretësirë alkooli 5%).
- Shto 40%një tretësirë e kaliumit kaustik në një sasi prej 0,1 ml, ose dy pika.
- Përzierja kryhet duke tundur lehtë epruvetën.
- Vlerëso rezultatin pas 15 minutash nga fillimi i eksperimentit.
Një metodë alternative e testimit është inkubacioni gjatë natës, koha e të cilit reduktohet në 18 orë ose deri në një ditë. Krahas kësaj metode përdoret edhe një test ekspres: një kulturë futet në një lak në 2 ml të mediumit, inkubohet për rreth katër orë, më pas shtohen reagentët në një sasi të barabartë prej 2-3 pika, përzihen dhe rezultati vlerësohet pas dhjetë minutash.
Kontrolli është një nga agjentët shkaktarë të pneumonisë Klebsiella pneumoniae - strain atcc 13883.
Vlerësimi i rezultatit
Pas kohës së kërkuar pas shtimit të reagentëve (nga 5 deri në 15 minuta), duhet të vërehet një ngjyrë e kuqe vishnje me një reagim pozitiv të theksuar, e kuqe dhe rozë - me një reagim të dobët pozitiv. Asnjë ndryshim nuk regjistrohet si rezultat negativ.
Teprica e potasit kaustik në një tretësirë mund të japë një imitim të një reagimi pozitiv, duke u ngjyrosur në një ngjyrë bakri. Në këtë rast, përgjigja negative e kolonisë së testuar duhet të regjistrohet. Gjithashtu, ngjyrosja e bakrit shfaqet në rastet kur vlerësimi bëhet një orë pas futjes së reagentëve.
Gjatë vlerësimit të rezultatit, duhet pasur parasysh se kultivimi i zgjatur i mikroorganizmave të studiuar (më shumë se tre ditë) çon në acidifikimin e mediumit, gjë që mund të çojë në një rezultat të gabuar të studimit. Reagimi mund të jetë pak pozitiv osenegativ i rremë.
Kërkesat për reagentët testues
Reagentët Voges-Proskauer duhet të plotësojnë kërkesa të tilla si përqendrimi i duhur, pastërtia e lartë dhe stabiliteti, i cili arrihet nëpërmjet ruajtjes së duhur.
Kitet e testimit të gatshëm për përdorim zakonisht përmbajnë reagentë për 100 ose më shumë përdorime dhe vijnë në shishe plastike ose xhami të lyer. Cilësia rregullohet nga dokumentacioni përkatës.
