Metodat e kërkimit mikroskopik janë metoda të studimit të një sërë objektesh duke përdorur pajisje speciale. Na lejon të marrim parasysh strukturën e substancave dhe organizmave, madhësia e të cilave është përtej zgjidhjes së syrit të njeriut. Në artikull do të analizojmë shkurtimisht metodat e kërkimit mikroskopik.
Informacion i përgjithshëm
Metodat moderne të ekzaminimit mikroskopik përdoren në praktikën e tyre nga specialistë të ndryshëm. Midis tyre janë virologë, citologë, hematologë, morfologë e të tjerë. Metodat kryesore të ekzaminimit mikroskopik janë të njohura për një kohë të gjatë. Para së gjithash, kjo është një metodë e lehtë për të parë objektet. Vitet e fundit, teknologji të tjera janë futur në mënyrë aktive në praktikë. Kështu, metodat e hulumtimit me kontrast fazor, ndriçues, ndërhyrje, polarizimi, infra të kuqe, ultravjollcë, stereoskopike kanë fituar popullaritet. Të gjitha ato bazohen në karakteristika të ndryshme. Sveta. Përveç kësaj, përdoren gjerësisht metodat e hulumtimit mikroskopik elektronik. Këto metoda ju lejojnë të shfaqni objekte duke përdorur një rrymë të drejtuar grimcash të ngarkuara. Duhet të theksohet se metoda të tilla studimi përdoren jo vetëm në biologji dhe mjekësi. Metoda mikroskopike e studimit të metaleve dhe lidhjeve në industri është mjaft e popullarizuar. Një studim i tillë bën të mundur vlerësimin e sjelljes së nyjeve, zhvillimin e teknologjive për të minimizuar probabilitetin e dështimit dhe rritjen e forcës.
Mënyra të lehta: karakteristika
Metoda të tilla mikroskopike për studimin e mikroorganizmave dhe objekteve të tjera bazohen në rezolucione të ndryshme të pajisjes. Faktorë të rëndësishëm në këtë rast janë drejtimi i rrezes, veçoritë e vetë objektit. Kjo e fundit, në veçanti, mund të jetë transparente ose e errët. Në përputhje me vetitë e objektit, vetitë fizike të fluksit të dritës ndryshojnë - shkëlqimi dhe ngjyra, për shkak të amplitudës dhe gjatësisë së valës, planit, fazës dhe drejtimit të përhapjes së valës. Metoda të ndryshme kërkimore mikroskopike bazohen në përdorimin e këtyre karakteristikave.
Specifikat
Për të studiuar me metoda të lehta, objektet zakonisht pikturohen. Kjo ju lejon të identifikoni dhe përshkruani disa nga vetitë e tyre. Kjo kërkon që indet të fiksohen, pasi ngjyrosja do të zbulojë struktura të caktuara vetëm në qelizat e vrarë. Në qelizat e gjalla, boja izolohet si një vakuolë në citoplazmë. Nuk pikturon struktura. Por me ndihmën e një mikroskopi me dritë mund të ekzaminohen edhe objektet e gjalla. Për këtë përdoret një metodë jetike studimi. Në raste të tilla, përdoret një kondensator me fushë të errët. Është ndërtuar në një mikroskop drite.
Studimi i objekteve të palyera
Kryhet duke përdorur mikroskopin me kontrast fazor. Kjo metodë bazohet në difraksionin e rrezes në përputhje me veçoritë e objektit. Në procesin e ekspozimit, vërehet një ndryshim në fazën dhe gjatësinë e valës. Ka një pllakë të tejdukshme në objektivin e mikroskopit. Objektet e gjalla ose fikse, por jo me ngjyra, për shkak të transparencës së tyre, pothuajse nuk ndryshojnë ngjyrën dhe amplituda e rrezes që kalon nëpër to, duke provokuar vetëm një zhvendosje në fazën e valës. Por në të njëjtën kohë, pasi ka kaluar nëpër objekt, fluksi i dritës devijon nga pllaka. Si rezultat, midis rrezeve që kalojnë nëpër objekt dhe hyjnë në sfondin e lehtë, shfaqet një ndryshim në gjatësinë e valës. Në një vlerë të caktuar, ndodh një efekt vizual - një objekt i errët do të jetë qartë i dukshëm në një sfond të lehtë, ose anasjelltas (në përputhje me tiparet e pllakës së fazës). Për ta marrë atë, diferenca duhet të jetë së paku 1/4 e gjatësisë së valës.
Metodë anoptrale
Është një lloj metode e kontrastit fazor. Metoda anoptral përfshin përdorimin e një lente me pllaka të veçanta që ndryshojnë vetëm ngjyrën dhe shkëlqimin e dritës së sfondit. Kjo zgjeron ndjeshëm mundësitë e studimit të objekteve të gjalla të pa lyer. Metoda mikroskopike e kontrastit fazor përdoret në mikrobiologji, parazitologji në studimin e qelizave bimore dhe shtazore,organizmat më të thjeshtë. Në hematologji, kjo metodë përdoret për llogaritjen dhe përcaktimin e diferencimit të elementeve të gjakut dhe palcës kockore.
Teknikat e ndërhyrjes
Këto metoda kërkimore mikroskopike në përgjithësi zgjidhin të njëjtat probleme si ato të kontrastit fazor. Sidoqoftë, në rastin e fundit, specialistët mund të vëzhgojnë vetëm konturet e objekteve. Metodat e hulumtimit mikroskopik të ndërhyrjes ju lejojnë të studioni pjesët e tyre, të kryeni një vlerësim sasior të elementeve. Kjo është e mundur për shkak të bifurkacionit të rrezes së dritës. Njëra rrjedhë kalon nëpër grimcat e objektit, dhe tjetra kalon pranë. Në okularin e një mikroskopi, ato konvergojnë dhe ndërhyjnë. Diferenca e fazës që rezulton mund të përcaktohet nga masa e strukturave të ndryshme qelizore. Duke e matur në mënyrë të njëpasnjëshme me indekset e dhëna të thyerjes, është e mundur të përcaktohet trashësia e indeve jo të fiksuara dhe e objekteve të gjalla, përmbajtja e proteinave në to, përqendrimi i lëndës së thatë dhe ujit etj. Në përputhje me të dhënat e marra, specialistët janë në gjendje të vlerësojë në mënyrë indirekte përshkueshmërinë e membranës, aktivitetin e enzimës dhe metabolizmin qelizor.
Polarizimi
Kryhet duke përdorur prizma Nicol ose polaroide filmike. Ato vendosen midis ilaçit dhe burimit të dritës. Metoda e kërkimit mikroskopik të polarizimit në mikrobiologji bën të mundur studimin e objekteve me veti johomogjene. Në strukturat izotropike, shpejtësia e përhapjes së dritës nuk varet nga rrafshi i zgjedhur. Në këtë rast, në sistemet anizotropike, shpejtësia ndryshon në përputhje medrejtimi i dritës përgjatë boshtit tërthor ose gjatësor të objektit. Nëse madhësia e përthyerjes përgjatë strukturës është më e madhe se përgjatë asaj tërthore, krijohet përthyerja e dyfishtë pozitive. Kjo është karakteristikë e shumë objekteve biologjike që kanë një orientim të rreptë molekular. Ata janë të gjithë anizotropikë. Kjo kategori, në veçanti, përfshin miofibrilet, neurofibrilet, qerpikët në epitelin ciliar, fijet e kolagjenit dhe të tjera.
Vlera e polarizimit
Krahasimi i natyrës së përthyerjes së rrezeve dhe indeksit të anizotropisë së objektit bën të mundur vlerësimin e organizimit molekular të strukturës. Metoda e polarizimit vepron si një nga metodat histologjike të analizës, përdoret në citologji etj. Në dritë mund të studiohen jo vetëm objektet me ngjyra. Metoda e polarizimit bën të mundur studimin e preparateve të panjollosura dhe të pafiksuara - vendase - të seksioneve të indeve.
Truke ndriçuese
Ato bazohen në vetitë e disa objekteve për të dhënë një shkëlqim në pjesën blu-vjollcë të spektrit ose në rrezet UV. Shumë substanca, të tilla si proteinat, disa vitamina, koenzima, barna, janë të pajisura me luminescencë primare (të brendshme). Objekte të tjera fillojnë të shkëlqejnë kur shtohen fluorokrome, ngjyra speciale. Këta aditivë përhapen në mënyrë selektive ose difuze në struktura individuale qelizore ose komponime kimike. Kjo veti formoi bazën për përdorimin e mikroskopisë së lumineshencës për histokimike dhestudime citologjike.
Zonat e përdorimit
Me anë të imuno-fluoreshencës, ekspertët zbulojnë antigjenet virale dhe përcaktojnë përqendrimin e tyre, identifikojnë viruset, antitrupat dhe antigjenet, hormonet, produkte të ndryshme metabolike etj. Në këtë drejtim, në diagnostikimin e herpesit, shytave, hepatitit viral, gripit dhe infeksioneve të tjera, përdoren metoda lumineshente për ekzaminimin e materialeve. Metoda e imunofluoreshencës mikroskopike bën të mundur njohjen e tumoreve malinje, përcaktimin e zonave ishemike në zemër në fazat e hershme të një ataku kardiak etj.
Përdorimi i dritës ultravjollcë
Ai bazohet në aftësinë e një sërë substancash të përfshira në qelizat e gjalla, mikroorganizmat ose indet fikse, por të pangjyrosura, transparente ndaj dritës së dukshme për të thithur rrezet UV të një gjatësi vale të caktuar. Kjo është tipike, në veçanti, për komponimet makromolekulare. Këtu përfshihen proteinat, acidet aromatike (metilalanina, triptofani, tirozina, etj.), Acidet nukleike, bazat piramidale dhe purine, etj. Mikroskopi ultravjollcë bën të mundur sqarimin e lokalizimit dhe sasisë së këtyre përbërjeve. Kur studiojnë objektet e gjalla, specialistët mund të vëzhgojnë ndryshime në proceset e tyre të jetës.
Extra
Mikroskopi infra të kuqe përdoret për të studiuar objektet që janë të errët ndaj dritës dhe rrezeve UV duke i thithur atostruktura rrjedhëse, gjatësia valore e të cilave është 750-1200 nm. Për të aplikuar këtë metodë, nuk ka nevojë të ekspozohen paraprakisht preparatet ndaj trajtimit kimik. Si rregull, metoda infra të kuqe përdoret në antropologji, zoologji dhe fusha të tjera biologjike. Për sa i përket mjekësisë, kjo metodë përdoret kryesisht në oftalmologji dhe neuromorfologji. Studimi i objekteve vëllimore kryhet duke përdorur mikroskop stereoskopik. Dizajni i pajisjes ju lejon të kryeni vëzhgim me sytë e majtë dhe të djathtë në kënde të ndryshme. Objektet opake ekzaminohen me një zmadhim relativisht të ulët (jo më shumë se 120 herë). Metodat stereoskopike përdoren në mikrokirurgji, patomorfologji dhe mjekësi ligjore.
Mikroskopi elektronik
Përdoret për të studiuar strukturën e qelizave dhe indeve në nivelet makromolekulare dhe nënqelizore. Mikroskopi elektronik ka bërë të mundur që të bëhet një hop cilësor në fushën e kërkimit. Kjo metodë përdoret gjerësisht në biokimi, onkologji, virologji, morfologji, imunologji, gjenetikë dhe industri të tjera. Një rritje e konsiderueshme në rezolucionin e pajisjeve sigurohet nga rrjedha e elektroneve që kalojnë në një vakum përmes fushave elektromagnetike. Këto të fundit, nga ana tjetër, krijohen nga lente speciale. Elektronet kanë aftësinë të kalojnë nëpër strukturat e një objekti ose të reflektohen prej tyre me devijime në kënde të ndryshme. Si rezultat, krijohet një ekran në ekranin luminescent të instrumentit. Me mikroskop transmetues fitohet imazh planar, me skanim përkatësisht vëllimor.
Kushtet e nevojshme
Vlen të theksohet se përpara se t'i nënshtrohet ekzaminimit mikroskopik elektronik, objekti i nënshtrohet një përgatitjeje të veçantë. Në veçanti, përdoret fiksimi fizik ose kimik i indeve dhe organizmave. Materiali seksional dhe i biopsisë, përveç kësaj, është i dehidratuar, i ngulitur në rrëshirë epokside, i prerë me thika diamanti ose qelqi në seksione tepër të holla. Më pas ato krahasohen dhe studiohen. Në një mikroskop skanues, sipërfaqet e objekteve ekzaminohen. Për ta bërë këtë, ato spërkaten me substanca të veçanta në një dhomë vakum.
